Hücreler ayrılmış göründüğünde, tripsini inaktive etmek için 2 hacim önceden ısıtılmış tam büyüme ortamı ekleyin. Hücrelerin %>95'inin geri kazanılmasını sağlamak için hücre katmanı yüzeyi üzerinde birkaç kez pipetleme yaparak ortamı nazikçe dağıtın.
Tripsin aktivitesini nasıl durdurabilirim?
Tripsin sindirimi, dondurarak veya formik, asetik veya trifloroasetik asit ekleyerek reaksiyonun pH'ını pH 4'ün altına düşürerek durdurulabilir (tripsin, pH, pH 4'ün üzerine çıkar. Sindirilmiş numuneler -20°C'de saklanabilir.
Tripsini nötralize eden nedir?
Kalsiyum ve magnezyum iyonları içeren bir tampon ayrıca tripsin aktivitesini de yavaşlatacaktır. Ancak FBS, tripsin aktivitesini engellemenin daha etkili yoludur.
Serum tripsini etkisiz hale getirir mi?
Serum, böbreklerin enzimatik sindiriminden kalan kalan tripsini ve daha sonra hücreler tarafından sentezlenen proteolitik enzimleri inaktive eder. Taze tripsinize edilmiş hücreler, kalıntı tripsini çıkarmak için tekrar tekrar yıkanmaları şartıyla, serum yokluğunda tek tabakalara büyütülebilir.
Tripsin'i devre dışı bırakmak için ne kadar medya gerekir?
Tripsininizle en az 1:1 oranında %5-10 serum içeren ortam kullandığınız sürece, yeterli inhibisyon ve ardından santrifüjleme olmalıdır. ve taze ortam ile orta değişim.
