Önceki hacmin onda birine kadar ultrafiltrasyon ile numunenizin tuzunu da giderebilirsiniz, bu tekrar seyreltir ve UF adımını tekrarlar. Tuzdan arındırma için en iyi yöntem, ultrafiltrasyondan (klasik, santrifüj değil) ziyade 50 mM tampona karşı jel filtrasyonu ile tuzdan arındırmadır.
Protein saflaştırmasında tuzdan arındırma nedir?
Tuzdan arındırma, protein çözeltilerinden tuzları uzaklaştırmak için kullanılır, nükleik asitlerden fenol veya birleşik olmayan nükleotidler veya konjuge proteinlerden aşırı çapraz bağlama veya etiketleme reaktifleri.
Proteinleri nasıl arındırırsınız?
Toplu protein saflaştırmasında, proteinleri izole etmek için yaygın bir ilk adım çökeltme ile amonyum sülfat (NH4) 2SO4. Bu, artan miktarlarda amonyum sülfat ilave edilerek ve çökeltilmiş proteinin farklı fraksiyonları toplanarak gerçekleştirilir. Daha sonra, amonyum sülfat diyaliz kullanılarak uzaklaştırılabilir.
Değişim proteinlerini nasıl tamponlarsınız?
Bununla birlikte,
Tampon değişimi, kolon reçinesi ile örneğin bitmesi gereken tampon ile ilk dengeleme ile gerçekleştirilir. Her iki durumda da, numuneyi içine taşıyan tampon bileşenleri sütun, sütunun önceden dengelendiği çözümle değiştirilecektir.
Proteinlerin tuzunun giderilmesi için aşağıdaki kromatografi tekniklerinden hangisi uygulanabilir?
Yukarıda bahsedildiği gibi, jel filtrasyonu protein için etkili bir şekilde kullanılabilirtuzdan arındırma ve önce jel filtrasyon kolonunun su ile dengelenmesiyle gerçekleştirilir. Ancak tampon değişimi, ilk olarak kolon reçinesinin hedef tamponla dengelenmesiyle gerçekleştirilir.
