Öncelikle, hem EcoR1 hem de Xba1, DNA'yı sindirirken (Nde1'de olduğu gibi) 5' çıkıntı bırakır. Her iki durumda da 3' ucu girintilidir, bu nedenle polyermase bazlar ekleyebilir. İkinci olarak, tüm polimerazlar sadece 3' ucuna bazlar ekleyebilir, bu nedenle Klenow kör uçlar oluşturmak için her iki sitenin de geri çekilmiş 3' ucuna 4 baz ekleyecektir.
Kısıtlama enzimleri 5 fosfat bırakır mı?
Kısıtlama enzimleri tarafından sindirilen vektörler ve ekler gerekli terminal modifikasyonlarını (5' fosfat ve 3' hidroksil) içerirken, Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PCR) tarafından oluşturulan fragmanlar olmayabilir.
Kör uçlar bağlanabilir mi?
Kör uçlu ligasyon
Kör uçlu ligasyon, çıkıntılı uçların baz eşleşmesini içermez, bu nedenle herhangi bir kör uç başka bir kör uca bağlanabilir. SmaI ve EcoRV gibi kısıtlama enzimleri tarafından kör uçlar oluşturulabilir.
Taq polimeraz kör uçlar üretir mi?
Yes… PCR'de son uzatma adımını 72 dC'de tutarsanız Taq Polymerase A-Çıkıntıları ekler. Çoğunlukla TA Klonlama için kullanılır.
DNA dizilemesinde neden Klenow fragmanı kullanılır?
Klenow parçası, aşağıdakiler gibi araştırmaya dayalı görevler için son derece yararlıdır: Tek sarmallı şablonlardan çift sarmallı DNA sentezi . 5' çıkıntıyı köreltmek için DNA fragmanlarının 3' ucunun geri çekilmesi . Çıkıntılı 3' çıkıntıları sindirme.
