Primer dimer artefaktları tipik olarak, istenen amplikon için eşik döngü sayısından daha yüksek olan büyük bir eşik döngü sayısında (genellikle > 35 döngü) meydana gelir. Primer dimerler, heterolog genomik DNA eklendiğinde belirgin şekilde artar.
Bir DNA jeli üzerindeki primer dimerleri nerede görürsünüz?
Kantitatif olmayan son nokta PCR'sinde, primer dimer, bir agaroz jel üzerinde az ya da çok soluk bir smear olarak görünecektir, ilgilenen ürün bandının altında.
Primer dimerleri nasıl oluşur?
Primer dimerleri oluşur İki primer birbirine bağlandığında, primer tamamlayıcılık bölgeleri nedeniyle şablon DNA yerine.
Primer dimerleri nasıl tespit edersiniz?
Primer-dimerleri kontrol etmenin en kolay yolu, tepkilerinizi negatif kontrolünüzle (DNA veya RNA yerine su) karşılaştırmaktır. Negatif kontrolde primer dimerleri oluşmaya devam edecektir. Bazı primer kümelerinin diğerlerinden daha dimer oluşturması daha olasıdır.
Astar dimerleri neden görünüyor?
Çoğunlukla primer dimerleri görülür PCR reaksiyon karışımındaki yüksek primer konsantrasyonu nedeniyle. Veya PCR amplifikasyonu yoksa ve agaroz jelde primer dimer üzerinde görebilirsiniz. PCR ürününü görebiliyorsanız, prime konsantrasyonunu az altabilir ve diğer koşulları aynı tutabilirsiniz.
