Tripsinizasyon, proteinleri parçalayan bir proteolitik enzim olan tripsin kullanılarak, yapışık hücreleri kültürlendikleri damardan ayırmak için hücre ayrışma işlemidir. Bir hücre kültürüne eklendiğinde tripsin, hücrelerin damara yapışmasını sağlayan proteinleri parçalar.
Hücreleri neden tripsinize ederiz?
Tripsinizasyon genellikle hücrelerin yeni bir kaba geçişine izin vermek, deney için gözlem yapmak veya bir yüzdesinin çıkarılmasıyla şişedeki birleşme derecesinin az altılması için yapılır. hücreler.
Tripsin hücreleri ayırmak için nasıl çalışır?
Tripsin/EDTA, hücreleri ayırmak için birleşik bir yöntemdir. Tripsin, hücre-hücre ve hücre-matriks etkileşimlerindeki adhezyon proteinlerini, adezyon proteinlerinin amino asidini, eğer yukarı akış amino asidi prolin değilse C-terminali üzerindeki lizin veya agininde keserek keser.
Tripsinize yapışık hücreleri nasıl elde edersiniz?
Prosedür
- Besiyerini aspirasyon yoluyla kültür kabından çıkarın ve tek tabakayı Ca2+ ve Mg içermeyen bir tuz solüsyonuyla yıkayın 2+ serumun tüm izlerini kaldırmak için. …
- Yeterli tripsin veya tripsin/EDTA solüsyonunu kültür kaplarına tek hücreli tabakayı tamamen kaplayacak şekilde dağıtın ve ~2 dakika 37 °C inkübatöre yerleştirin.
Hücre kültüründe tripsini nasıl devre dışı bırakırım?
Hücreler ayrılmış göründüğünde 2 cilt ekleyin tripsini inaktive etmek için önceden ısıtılmış tam büyüme ortamı. Hücrelerin %>95'inin geri kazanılmasını sağlamak için hücre katmanı yüzeyi üzerinde birkaç kez pipetleme yaparak ortamı nazikçe dağıtın. Serumsuz kültürler için, Soya fasulyesi tripsin inhibitörü (Ürün No.
